تشخیص سریع ویبریو کلرا O۱ با استفاده از روش واکنش زنجیره ای پلیمراز – الیزا (PCR-ELISA)

● هدف:
ویبریو کلرا سروتایپ o۱ عامل وبای اپیدمیک شناخته شده است. همه گیری های اخیر وبا در نقاط مختلف جهان نیاز به وجود روشی سریع و مطمئن برای شناسایی ویبریو کلرا را بیش از پیش لازم می سازد. هر چند روش های کلاسیک و متداول میکروبیولوژی حساس و اختصاصی اند اما هر کدام محدودیت های خاص خود را دارند. بنابراین در این مقاله، تکنیک جدیدی برای تشخیص عامل ویبریو کلرا O۱ تحت عنوان واکنش زنجیره ای پلیمراز – الیزا (PCR-ELISA) معرفی گردیده است.
● روش بررسی:
توالی ۳۷۵ جفت بازی از ژن کد کننده زیر واحد B سم وبا (ctxB) با DIG-dUTP تکثیر و نشاندار گردید. محصول PCR نشاندار شده، در میکروپلیت ها کوت (coat) و با استفاده از آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین گانژوگه با آنزیم پراکسیداز (antidigoxigenin Fab-peroxydase) شناسایی شد. در ادامه این پژوهش جهت تایید و شناسایی محصول PCR نشاندار شده با دیگوکسی ژنین از پروب بیوتینه SH-۱ که مکمل بخش میانی ژن ctxB بود، استفاده شد. اختصاصیت این روش با استفاده از ۶ سویه باکتری ویبریو کلرا O۱، سالمونلا پاراتیفی C، شیگلا دیسانتری، پزودوموناس آئروجینوزا، انتروباکتر و کلبسیلا مورد بررسی قرار گرفت.
● یافته ها:
حساسیت تشخیص باکتری در نمونه های مورد بررسی با استفاده از نمونه باکتری ۵ CFU و با DNA ژنومی به میزان ۰.۵-۰.۶ پیکوگرم برای ویبریو کلرا O۱ تعیین گردید. محدودیت تشخیص نمونه باکتری با پروب مذکور همانند روش بالا با استفاده از نمونه باکتری ۵ CFU و با DNA ژنومی ۰.۵-۰.۶ پیکوگرم تعیین شد.
● نتیجه گیری:
PCR-ELISA در مقایسه با روشهای متداول PCR که مبتنی بر رنگ آمیزی با اتیدیوم بروماید می باشد، حساسیت بیشتری دارد. به نظر می رسد روش PCR-ELISA یک روش آزمایشگاهی مناسب و قابل اعتماد برای تشخیص عامل بیماری وبا می باشد.

میرلطیف موسوی
شهرام احمدی
رحیم سروری
جعفر سلیمیان
احمد کریمی راهجردی
شهرام نظریان
جعفر امانی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی