ساخت و تکثیر cDNA از mRNA ژن رمز گردان آنزیم P۵CS گیاه Arabidopsis thaliana

گیاهان وقتی در معرض خشکی و شوری قرار می گیرند با تنش اسمزی مواجه می شوند که برای مقابله با تنش اسمزی ایجاد شده تجمع اسمولیتهایی همچون پرولین، گلیسین بتانین و یا سایر ترکیبات مشابه را افزایش می دهند. در مسیر بیوسنتز این اسمولیتها آنزیمهایی دخالت دارند که بعضی از آنها کلیدی به حساب می آیند و با تغییر در تظاهر ژنهایی که این آنزیمها را کد می کنند می توان فراورده نهایی که اسمولیت مورد نظر می‍‍باشد را افزایش داد. این تحقیق بر روی آنزیم دلتا ـ۱ـ پرولین ـ۵ـ کربوکسیلات سنتتاز (P۵CS ) که یکی از آنزیم های کلیدی در مسیر بیوسنتز پرولین می‍باشد، انجام شد . ابتدا اقدام به ساخت cDNA از روی mRNA حاصل از گیاه ارابیدوپسیس تالیانا (Arabidopsis thaliana) گردید. برای اینکار RNA کل از برگهای گیاه آرابیدوپسیس تالیانا (Arabidopsis thaliana )، که در معرض تنش شوری قرار گرفته بود، استخراج گردید و سپس با استفاده از آنزیم رونویسی معکوس اقدام به ساخت DNA مکمل شد و کل mRNA به cDNA تبدیل گردید و با دو جفت آغازگر اختصاصی به طولهای ۲۷ و ۳۵ نوکلئوتید، و به کمک دستگاه ترموسایکلر، cDNA مربوط به آنزیم P۵CS دو رشته ای گردید و تکثیر شد. برای جفت پرایمر به ترتیب در انتهای ۵، مکان برشی برای آنزیم های EcoRI و BamHI در نظر گرفته شد تا در همسانه سازی cDNA تکثیر شده مشکلی وجود نداشته باشد. سپس با استفاده از پروب صحت انجام کار به تایید رسید.

علیرضا عباسی
فردوس رستگاری جزی
بهمن یزدی صمدی
اشرف الدین سخن سنج

منبع : پایگاه اطلاعات علمی