کشت و تکثیر یاخته‌های بنیادی لیمبوس انسان در محیط آزمایشگاه

● هدف:
ارزیابی کشت یاخته های بنیادی لیمبوس قرنیه انسانی با حفظ خواص ذاتی و قدرت تکثیری آنها در آزمایشگاه به منظور پیوند در بیماران دچار نقص یاخته های بنیادی ناحیه لیمبوس.
● روش پژوهش:
نمونه های لیمبوس حاوی یاخته های بنیادی، از بانک چشم جمهوری اسلامی ایران تهیه شد. کشت قطعات لیمبوس بر روی پرده آمنیونی بدون یاخته (برهنه) به مدت ۲۱ روز صورت پذیرفت . موفولوژی یاخته ها پس از ۱۳ و ۲۱ روز کشت، توسط ایمونوسیتوشیمی، با استفاده از پادتن های کانکسین ۴۳ کراتین – ۳ و پان سیتو کراتین و بیان ژن های اختصاصی قرینه با روش RT-PCR مورد بررسی قرار گرفت.
● یافته ها:
پس از ۲ تا ۳ هفته یاخته های اپی تلیوم لیمبوس ، صفحه ای در اندازه تقریبی ۲×۲ cm۲ بر روی پرده آمنیونی برهنه تشکیل دادند. مطالعه هیستولوژی صفحه اپی تلیومی تشکیل شده نشان داد که این یاخته ها متشکل از ۴-۱ لایه یاخته ای بین محل قرارگیری قطعه بافتی و حاشیه کشت می باشند. بررسی های ایمونوسیتوشیمی با استفاده از نمونه های لیمبوس و قرینه طبیعی و لیمبوس کشت شده، نمایانگر بیان کراتین -۳ و کانکسین -۴۳ در نمونه های قرنیه طبیعی بود ولی بیان ضعیفی از این نشانگرها در یاخته های کشت شده دیده شد. هم چنین تحلیل داده های RT- PCR نشان داد که ژن P۶۳ وK۱۲ هم در یاخته های لیمبوسی کشت شده و هم در نمونه های لیمبوس طبیعی بیان می گردد؛ در حالی که در قرنیه ، تنها بیان ژن های K۳و k۱۲ دیده شده و بیان P۶۳ مشاهده نشد.
● نتیجه گیری:
مطالعه نشان داد که یاخته های لیمبوسی طی ۲۱ روز کشت خواص بنیادی خود را از نظر موفولوژی و بیان ژن های خاص آن ناحیه حفظ نمودند و می توان از آنها برای درمان بیماران دچار نقص یاخته های بنیادی لیمبوسی استفاده نمود.

محمدحسین بهاروند
مرضیه ابراهیمی
محمدعلی جوادی
بهرام عین الهی
محمد معصومی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی