بررسی تخم تریکوسترنژیلوس های جدا شده از گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP

● سابقه و هدف:
تریکوسترنژیلوس یکی از انگلهای مشترک انسان و دام است که آلودگی به آن معضلی اقتصادی و بهداشتی قلمداد میگردد. لذا در این مطالعه، تخم کرم گونه های مختلف تریکوستنرنژیلوس جدا شده از مدفوع گوسفندان منطقه اصفهان به روش PCR-RFLP و با استفاده از قطعه rDNA-ITS۲ مورد بررسی قرار گرفت.
● مواد و روشها:
مطالعه به روش توصیفی بر روی محتویات دستگاه گوارش۷۰ راس گوسفند کشتار شده در کشتارگاه های شهر اصفهان و خوراسگان انجام پذیرفت. تخمهای انگل با روش مستقیم و فلوتاسیون جدا و تخم کرم گونه های تریکوسترنژیلوس براساس شاخصهای ریخت شناسی، شناسایی و جمع آوری شدند، سپس با روش PCR-RFLP مورد بررسی قرار گرفتند. در مطالعه ژنوتیپی DNA ژنومی تخم کرمها، استخراج شد و واکنش PCR با پرایمر اختصاصی قطعه rDNA-ITS۲ انجام گرفت. محصول PCR هر ایزوله توسط آنزیمهای محدودکننده RsaI - HinfI - DraI هضم و بر روی ژل آگارزالکتروفورز شد و از آنها عکس تهیه گردید.
● یافته ها:
با توجه به تشابه مرفولوژی تخم گونه های مختلف تریکوسترنژیلوس در زیر میکرسکوپ تشخیص افتراقی آنها امکان پذیر نمی باشد، لذا تشخیص با استفاده از الگوی ژنوتیپی تخم کرمها به روش PCR-RFLP انجام پذیرفت. اندازه محصول PCRوDNA استخراج شده از تخم کرمها یکسان و حدود ۳۳۰ نوکلئوتید بود ولی الگوی PCR-RFLPگونه ها با یکدیگر متفاوت بود. پس از هضم محصول PCR آنها با آنزیم RsaI دو قطعه حدود ۱۳۸ و ۱۹۰ نوکلئوتیدی مشاهده شد. محصول PCR Trichostrungylus به دست آمده، با آنزیم DraI هضم نشد، اما سه گونه T.vitrinus T.aziei و T.colubrifornois هضم شدند و دو قطعه حدود ۱۱۰ و ۲۱۵ نوکلئوتیدی در T.axei و T.colubriformis رویت گردید که الگویی مشابه همدیگر داشتند. اما T.vitrinus واجد دو قطعه حدود ۱۴۵ و ۱۸۵ نوکلئوتیدی بود. از بین چهار گونه فوق تنها محصول PCR تریکوسترنژیلوس Colubriformis با آنزیم HinfI هضم شد و دو قطعه حدود ۹۰ و ۲۳۸ نوکلئوتیدی روی ژل اگارز مشاهده گردید.
● نتیجه گیری:
با توجه به تنوع گونه های انگلی و عدم تشخیص افتراقی آنها به روش میکروسکوپی پیشنهاد میشود با استفاده از پرایمرها و آنزیمهای محدودکننده مختلف، از روش PCR در تشخیص گونه های انگلی مورد نظر استفاده شود.

نادر پسته چیان
مهدی بقایی
حسین علی یوسفی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی