یک روش نوین برای بررسی حیات اسپرم با استفاده از MTT

● هدف:
ارائه یک روش نوین برای بررسی حیات اسپرم
● مواد و روشها:
نمونه های اسپرمی در محیط Ham’s F-۱۰ + ۱۰% HSA به مدت ۱۰ دقیه در دور ۲۵۰۰ شستشو داده شد و سپس آزمونهای (E&N) Eosin-nigrosin، Hypo-osmotic Swelling Test (HOST) و (۳-(۴.۵-dimethyl thiasol-۲yl)۲.۵ diphenyl terazolium bromide) MTT assay به طور همزمان روی هر یک از نمونه ها انجام شد. نمونه های اسپرمی در محیطهای مختلف با MTT مجاور شده و تاثیر محیطهای مختلف، pH محیط و زمان مورد بررسی قرار گرفت. سپس ضریب واریانس در روش MTT محاسبه و پس از به دست آوردن میزان اعتبار MTT با آزمونهای HOST و E&N مقایسه شد. در نهایت حساسیت و اختصاصی بودن این سه روش بررسی شد.
● یافته ها:
مناسبترین محیط برای MTT، Ham’s F-۱۰+ ۱۵mM Hepes+ ۱۰% HSA در ۷.۴=pH و زمان ۲ ساعت تعیین شد. سپس ضریب همبستگی معنی دار و بالایی بین آزمونهای MTT و HOST و E&N به دست آمد و نشان داده شد که هر سه روش از میزان حساسیت و اختصاصی بودن بالایی برخوردار هستند ولی درصد اختصاصی بودن روشهای MTT و E&N از HOST بالاتر بود.
● نتیجه گیری:
آزمون MTT به عنوان یک روش مناسب برای تشخیص، تفکیک و جدا نمودن اسپرمهای زنده از اسپرم مرده شناخته شد. استفاده از این روش در تشخیص و تفکیک اسپرمهای زنده بدون حرکت در روش درمانی ICSI پیشنهاد می گردد.

روشنک ابوترابی
ابراهیم اسفندیاری
محمد مردانی
محمدحسین نصراصفهانی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی