خالص سازی و مطالعه آنزیم پلی گالاکتوروناز جدایه با بیماریزایی زیاد

قارچ Fusarium oxysporum بعنوان یكی از عوامل مهم بیماریزا در نخود زراعی محسوب می‌شود و بیماری بوته زردی را در نخود ایجاد می‌كند و خسارات زیادی را به این محصول وارد می سازد . یكی از علتهای مهم …

قارچ Fusarium oxysporum بعنوان یكی از عوامل مهم بیماریزا در نخود زراعی محسوب می‌شود و بیماری بوته زردی را در نخود ایجاد می‌كند و خسارات زیادی را به این محصول وارد می سازد . یكی از علتهای مهم بیماریزایی قارچ ها آنزیمهای پكتیكی از جمله آنزیم پلی‎گالاكتوروناز است كه جزء آنزیمهای خارج سلولی محسوب شده و با تجزیه تركیبات پكتینی دیوارهٔ سلولی سلولهای گیاهی اولین مراحل آلودگی را فراهم می سازد.

جهت تخلیص آنزیم پلی‎گالاكتوروناز (EC ۳.۲.۱.۱۵) از جدایه (isolated) F۲۳(جدایه ای با شدت بیماریزایی زیاد) از تكنیك كروماتوگرافی تبادل یونی ،و نوع كاتیونی آن بر روی بستر CM-Sepharose Fast Flow با PH معادل ۵/۵ استفاده گردید. جهت جدا سازی پروتئینهای متصل به ستون از شیب نمك سدیم كلراید یك مولار استفاده شد‏‏‏‎‎‎. نتایج نشان داد در ناحیه غلظت نمكی بین ۴۵/۰ – ۲۵/۰ میلی مولار, یك قله با فعالیت آنزیمی وجود دارد‏‏‏‏‎‎‎. نمونه های با فعالیت آنزیمی بالا انتخاب ،مخلوط و پس از رسوب دهی با استن مورد استفاده قرار گرفت‏‏‏‏‎‎‎. نتایج حاصل ازSDS-PAGE وجود دو باند باوزنهای مولكولی حدود ۳۸ و ۴۰ كیلو دالتون را در جدایه F۲۳ نشان داد‏‏‏‎‎‎. همچنین در بررسی فعالیت آنزیمی توسط ژل پلی آكریل آمید حاوی سوبسترای آنزیمی‏‏‏‎‎‎، دو باند مشخص, مشاهده گردید كه نشان دهنده ایزوآنزیمهای این آنزیم است. ضمنا pH بهینه فعالیت آنزیم مورد مطالعه قبل و بعد از خالص سازی برابر ۵/۴ می‌باشد.