مطالعه ایزوآنزیم‌های اكتینیدین كیوی با الكتروفورز در ژل پلی‌اكریل‌آمید

اكتینیدین یك سیستئین پروتئاز است كه در میوه كیوی به ‌وفور یافت می‌شود. در این مطالعه ایزوآنزیم‌های اكتینیدین، جدا و با سه روش: الكتروفورز در ژل پلی‌اكریل‌آمید (SDS-PAGE)، ایزوالكتریك …

اكتینیدین یك سیستئین پروتئاز است كه در میوه كیوی به ‌وفور یافت می‌شود. در این مطالعه ایزوآنزیم‌های اكتینیدین، جدا و با سه روش: الكتروفورز در ژل پلی‌اكریل‌آمید (SDS-PAGE)، ایزوالكتریك فوكوسینگ (IEF) و الكتروفورز دوبعدی (۲DE) تعیین خصوصیت گردید. اكتینیدین از میوه كیوی (واریته هیوارد) با روش ترسیب توسط سولفات آمونیوم و كروماتوگرافی تعویض یون خالص گردید. برای سنجش فعالیت آنزیم از هیدرولیز كازئین استفاده شد. SDS-PAGE در شرایط احیایی، غیراحیایی و اوره انجام گرفت. IEF در آمفولین در محدوده ۵-۵/۳pH به‌‌روش آبگیری مجدد و الكتروفورز دوبعدی در هر دو جهت در ژل صفحه‌ای انجام گرفت.

نتایج SDS-PAGE در شرایط مختلف نشان داد كه آنزیم اكتینیدین بسته به شرایط الكتروفورزی وزن متفاوتی (۲۹-۲۰ كیلودالتون) از خود نشان می‌دهد. این نتایج نشان داد كه حرارت و احیای پیوند‌های دی‌سولفیدی برای بازشدن كامل مولكول و اشباع‌شدن آن با SDS ضروری است. نتایج IEF نشان داد كه اكتینیدین كیوی حاوی حداقل ۶ ایزوآنزیم با نقطه ایزوالكتریك (pI) در دامنه ۰۳/۴-۸/۳ و یك ایزوآنزیم با ۵/۳ pI است. این نتایج كه متفاوت از نتایج مطالعه مشابه بود، ناشی از تفاوت واریته‌ها و روش آزمایش می‌باشد. حركت ایزوآنزیمهای اكتینیدین در الكتروفورز دوبعدی نشان داد كه این مولكول‌ها علاوه بر تفاوت‌ pI ، دارای رفتار قابل توجهی در شرایط مختلف SDS-PAGE و الكتروفورز دو‌بعدی هستند كه در روش معمول SDS-PAGE دیده نمی‌شود