بیان پروتیین نو ترکیب P۳۹ بروسلا آبورتوس در باکتری اشریشیاکلی

● مقدمه:
بروسلوز از مهم‌ترین بیماری‌های زئونوتیک است که باعث سقط جنین و نازایی در دام‌ها و بروز تب مواج در انسان می‌گردد. استفاده از واکسن رایج یعنی سویه S۱۹ بروسلا آبورتوس عوارض متعددی برای دام‌ها دارد. پروتیین P۳۹ بروسلا از جمله پروتیین‌های فضای پری پلاسمیک است که به عنوان یکی از شاخص‌های مهم ایمنی زا مطرح است. با تولید پروتیین نو ترکیب P۳۹ می‌توان مطالعات بیشتری در زمینه توانایی این پروتئین در تحریک پاسخ‌های ایمنی‌زا بر علیه بروسلا انجام داد. لذا در این تحقیق تولید و تخلیص این پروتئین در باکتری اشریشیا کلی بصورت نو ترکیب انجام گرفته است.
● روش کار:
در این تحقیق تجربی با استفاده ازواکنش زنجیره‌ای پلیمراز، ژن P۳۹ از باکتری بروسلا آبورتوس تکثیر گردید. پس از تخلیص ژن P۳۹، در ناقلین پلاسمیدی pSK+ و pGEX۴T۱ کلون گردید. بنابر این ساختارهای pSK+-P۳۹ و pGEX۴T۱-P۳۹ تهیه گردید. برای تولید پروتیین نوترکیب P۳۹ ابتدا ساختار پلاسمیدی pGEX۴T۱-P۳۹ وارد باکتری اشریشیا کلی سویه BL۲۱ شد. سپس تولید پروتیین با القای پلاسمید pGEX۴T۱-P۳۹ توسط IPTG صورت گرفت. پروتیین تولید شده با استفاده از کیت تخلیص پروتئین گلوتاتیون اس ترانسفرآز سفارز خالص گردید. میزان پروتیین خالص شده با استفاده از روش براد فورد اندازه‌گیری شد.
● نتایج:
ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده توسط PCR کلون شده در ناقل پلاسمیدی+pSK کاملا با ژنP۳۹ بروسلا آبورتوس یکسان بود. تولید پروتیین P۳۹ با القا پلاسمید pGEX۴T۱-P۳۹ انجام گردید. میزان پروتیین خالص شده برابر ۲۰۰ میکروگرم در میلی لیتر بدست آمد.
● نتیجه گیری:
تولید پروتیین نو ترکیب P۳۹ بروسلا آبورتوس که در سیتوپلاسم باکتری اشریشیا کلی ناپایدار است، با استفاده از ناقلین دارای پروتیین الحاقی نظیر pGEX۴T۱ در میزبان اشریشیا کلی سویه BL۲۱ امکان‌پذیر است.

سیدحمیدرضا ابطحی
علی هاتف سلمانیان
سیما رافتی
قربان بهزادیان نژاد

منبع : پایگاه اطلاعات علمی