مطالعه تولید آنزیم كیتیناز در قارچ تریكودرما

در طول كشت گیاهان زراعی كاهش محصول ناشی از حمله قارچهای بیماریزا به گیاهان همواره بعنوان مهمترین عامل زیانهای اقتصادی محسوب میشود. قارچ تریكودرما، بدلیل ترشح بعضی از انواع …

در طول كشت گیاهان زراعی كاهش محصول ناشی از حمله قارچهای بیماریزا به گیاهان همواره بعنوان مهمترین عامل زیانهای اقتصادی محسوب میشود. قارچ تریكودرما، بدلیل ترشح بعضی از انواع آنزیمهای كیتینازی، بعنوان عاملی قوی در كنترل بیولوژیك بیماریهای قارچی مورد استفاده قرار می گیرد.

در این تحقیق، شرایط بهینه جهت تولید آنزیم كیتیناز در جدایه های مختلف قارچ تریکودرما مورد مطالعه قرار گرفت. شرایط بهینه بدست آمده عبارتند از , ۵=pH , ۴۸ ساعت کشت در دمای ۲۵ درجه سانتی گراد و هوادهی مناسب. پس از بهینه سازی شرایط تولید آنزیم كیتیناز در سه جدایه انتخابی قارچ تریكودرما، فعالیت آنزیم كیتینازی در ۳۰ جدایه این قارچ در شرایط بهینه بدست آمده بررسی و جدایه Trichoderma harzianum۸ با فعالیت U/ml ۹۷ و فعالیت ویژه U/mg ۳۵ بعنوان فعال ترین و جدایه Trichoderma sp. T.۲۶ با فعالیت U/ml ۴۴ و فعالیت ویژه U/mg ۵ بعنوان ضعیف ترین جدایه انتخاب شدند. برای بررسی بیان ژنهای اندوكیتیناز chit۳۱، chit۳۳ و chit۴۲ در جدایه Trichoderma harzianum۸، كه فعال ترین جدایه از نظر تولید آنزیم كیتیناز میباشد, الگوی SDS-PAGE در محیط های حاوی منابع كربنی متفاوت مقایسه شد و محل تقریبی باندهای سه اندوكیتیناز تعیین گردید. ضمنا، سه جفت آغازگر اختصاصی بر اساس توالیهای موجود از این ژنها در NCBI طراحی شد و پس از انجام PCR اختصاصی، محصولات PCR توسط هضم با آنزیمهای Restriction Endonuclease تأیید شد. بررسی نتایج بدست آمده از این بخش، حضور هر سه ژن اندوكیتیناز را در این جدایه قارچی تأیید می كند. بدین ترتیب، با توجه به مطالعات انجام شده بر روی جدایهT. harzianum۸، می توان از این جدایه در مطالعات مربوط به كنترل بیولوژیك بیماریهای قارچی استفاده نمود.