استفاده از آزمایش RT-PCR برای تشخیص ویروس برونشیت عفونی طیور و تعیین سروتیپ آن

این مطالعه به منظور دستیابی به یك روش تشخیص مطمئن و سریع برای تشخیص ویروس برونشیت عفونی طیور در نمونه های كلینكی صورت پذیرفت. لذا واكنش RT-PCR برای تشخیص ویروس در نمونه همچنین واكنش …

این مطالعه به منظور دستیابی به یك روش تشخیص مطمئن و سریع برای تشخیص ویروس برونشیت عفونی طیور در نمونه های كلینكی صورت پذیرفت. لذا واكنش RT-PCR برای تشخیص ویروس در نمونه همچنین واكنش Multiplex-PCR برای تشخیص سروتیپ ویروس بهینه سازی گردید. برای بهینه سازی آزمایش از ویروس واكسن H۱۲۰ برونشیت عفونی طیور استفاده گردیده است. برای انجام اولین مرحله از آزمایش، استخراج RNA ویروس با استفاده از محلول PNAfast صورت پذیرفت و سپس ساخت cDNA و بدنبال آن واكنش PCR بابكارگیری پرایمرهایی از ژن s-۱ ویروس انجام گردید. ضمنا در آزمایش multiplex-PCR از پرایمرهای اختصاصی ۳ سروتیپ ماساچوست، آركانزاس و كانكتیكانت كه از سكانس این ژن تهیه شده است، استفاده گردید بطوریكه تشخیص تفریقی این سروتیپ ها از یكدیگر براساس اندازه قطعه DNA تكثیر شده در آزمایش امكان پذیر می گردد. در آزمایش PCR مربوط به تشخیص ویروس، قطعه ای از ژن S-۱ به طول ۵۰۰ جفت باز و در آزمایش Multiplex-PCR مربوط به تعیین سروتیپ ویروس، قطعه ای به طول ۳۵۰ جفت باز كه نشانگر سروتیپ ماساچوست است، تكثیر گردید. با توجه به آنكه ژن S-۱ دارای منطقه ای hypervariable در بین سویه های مختلف ویروس می باشد و بیشترین تغییرات ژنتیكی ویروس ها را نشان می دهد، تعیین سكانس قطعه تكثیر شده از این ژن اهمیت زیادی در شناسائی ویروس برونشیت و Subtypeهای آن خواهد داشت. باتوجه به مشكلات موجود در تشخیص ویروس از طریق كشت آن در تخم مرغ جنین دار، از این روش برای تشخیص سریع و دقیق ویروس برونشیت عفونی طیور در نمونه های كلینكی (حداكثر در ۲ روز) و همچنین Subtype آن می توان استفاده نمود.