بررسی اثر افزایش اولیه TNF a بر فنوتیپ و عملکرد سلول های دندریتیک مشتق از سلول های تک هسته ای خون بند ناف

بررسی اثر افزایش اولیه فاکتور آلفا نکروز دهنده تومور TNF a در فنوتیپ و عملکرد سلول های دندریتیک مشتق از سلول های منوسیت خون بند ناف

● هدف:

بررسی اثر افزایش اولیه فاکتور آلفا نکروز دهنده تومور (TNF-a) در فنوتیپ و عملکرد سلول های دندریتیک مشتق از سلول های منوسیت خون بند ناف.

مواد و روش ها: سلول های تک هسته ای از خون بند ناف افراد سالم جدا و به دو گروه تقسیم شدند، در هر دو گروه از محیط کشت حاوی ترکیبات سایتوکاینی GM-CSF, SCF, Flt۳L و IL-۴ استفاده شد. با این تفاوت که در گروه (+)TNF، به ترکیبات سایتوکاینی فوق میزان ۳ نانوگرم بر میلی لیتر TNF-a در روزهای ۰، ۷ و ۱۴ اضافه شد، و در گروه (-)TNF، هیچ ترکیب دیگری به سایتوکاین های فوق اضافه نشد. سلول ها در هر دو گروه به مدت ۱۴ روز کشت شدند و سپس در روز ۱۴ به منظور القای بلوغ ۱۰ نانوگرم بر میلی لیترTNF-a و یا ۱ نانوگرم بر میلی لیتر LPS به محیط کشت اضافه شد و کشت به مدت ۴ روز دیگر ادامه یافت. در روزهای ۰، ۷ و ۱۴، مورفولوژی و فنوتیپ سلول ها توسط میکروسکوپ نوری و فلوسیتومتری مورد بررسی قرار گرفت و عملکرد سلول های دندریتیک بالغ و نابالغ نیز توسط واکنش مختلط لکوسیتی و سنجش سیتوکاین های ۱۲-IL و ۱۰-IL ارزیابی شد.

● یافته ها:

هم کشتی سلول های بنیادی خون ساز و منوسیت های خون بند ناف، سبب تولید سلول های دندریتیک با ظاهر ویلی دار شد که شاخص های سلول های دندریتیک را بیان می کردند. افزایش اولیه TNF-aسبب افزایش بقای سلول ها در هفته اول کشت و تولید DC های بالغ با شاخص های بلوغ بیشتر شد که توانایی ترشح مقادیر زیادی ۱۲-IL را دارا بودند. در عوض، افزایش TNF-a تنها به عنوان فاکتور بلوغ و در انتهای کشت، سبب تولید مجموعه هتروژنی از سلول های DC بالغ، نابالغ و سلول های بنیادی شد که توانایی ترشح ۱۲-IL کمتر و ۱۰-IL بیشتری داشتند. در هر دو گروه DC بالغ سبب افزایش تکثیر T آلوژن شد.

● نتیجه گیری:

در این مطالعه روشی ساده و کم هزینه برای تولید سلول های دندریتیک از سلول های تک هسته ای خون بند ناف بدون انجام مراحل دشوار تخلیص سلولی ارایه شده است و مشخص شد حضور TNF در روزهای اولیه کشت و نیز حضور سایر سلول های تک هسته ای منجر به تولید سلول های دندریتیک هموژن تر با توانایی تولید ۱۲-IL از مسیر CD۱۴ می شود. به نظر می رسد TNF با اثر بر سلول های دندریتیک و منوسیتی که در مخلوط سلولی وجود دارند، سبب ورود سلول های بنیادی خون ساز به مسیر میلوییدی می شوند و منجر به تولید سلول های دندریتیک از نوع DC۱ می شوند. این روش مدلی ساده برای پیگیری پیامد تمایز سلول ها دندریتیک در حضور TNF-a که در شرایط التهابی و برخی بیماری ها همچون آرتریت روماتویید افزایش می یابد، ارایه میدهد.

مرضیه ابراهیمی

زهیر محمدحسن

سیدمحمد موذنی

جمشید حاجتی

سعید کاظمی آشتیانی

پریسا حیات